產(chǎn)生pcr儀擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒有條帶或條帶很淺的原因有以下幾種：

1、反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系，這是常見的原因；

2、與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)：建議在試驗(yàn)中加入對(duì)照RNA；

3、*鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10：建議用Oligo（dT）或隨機(jī)引物代替基因特異性引物（GSP）用于*鏈合成。

4、由于RNA模板存在二級(jí)結(jié)構(gòu)，如環(huán)狀結(jié)果，有可能導(dǎo)致GSP無(wú)法與模板退火；或SSⅡ反轉(zhuǎn)錄酶無(wú)法從此引物進(jìn)行有效延伸。

5、目的mRNA中含有強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄中止位點(diǎn)，可以試用以下方法解決：

①將*鏈的反應(yīng)溫度提高至50℃。

②使用隨機(jī)六聚體代替Oligo（dT）進(jìn)行*鏈反應(yīng)。